ADER 8.1.2/2023
Titlul proiectului : ADER 8.1.2./2023 “Cercetari privind calitatea si cantitatea carnii din caracasa evaluate prin metoda non-invazivă ecografică și a biomarkerilor moleculari la rasele de taurine pentru carne in conformitate cu noile cerințe privind bunăstarea animalelor’’
Tipul proiectului : Sectorial
Nr. Contract/data : ADER 8.1.2./21.07.2023
Unitatea Finanțatoare : MINISTERUL AGRICULTURII ȘI DEZVOLTĂRII RURALE
Buget: 1300000 lei
Coordonator proiect: Institutul Național de Cercetare-Dezvoltare pentru Biologie și Nutriție Animală -IBNA Balotești
Director proiect : Cristina VAN
Scopul proiectului :
- Identificarea și simplificarea evaluării calității cărnii la rasele de taurine, cu calități deosebite în completarea cerinței la nivel mondial, tendință care a luat amploare și în fermele crescătorilor români
- Analiza și evaluarea calității producției de carne la rasele de taurine specializate pentru producția de carne din România se va face pentru prima oară prin utilizarea unor metode moderne, non invazive și anume tehnica ecografică, prin procedeul cu ultrasunete și tehnici de biologie moleculară PCR-RFLP, pentru identificarea de markeri specifici corelați cu calitatea cărnii și carcasei
Rezumat/Stadiul realizării :
Datorită exploziei demografice și a schimbărilor climatice, omenirea trebuie să găsească soluții sustenabile și durabile pentru a asigura resurse noi de proteină pentru completarea necesarului actual și viitor. Toată această problematică complexă își va gasi rezolvarea prin cercetarea aprofundată în acord cu noile cerințe și reglementări privind siguranța alimentară a consumatorului la nivel european și global. Aceste direcții propuse de proiectul de față vor rezolva și îmbunătăți prin metodele non-invazive (ecografia și markeri moleculari) problematica actuală cu o echipă de cercetători specializați în ameliorare și genetică, biologie moleculară și biotehologie cu experiență în cercetarea experimentală statistică și tehnică experimentală. În cadrul proiectului există patru etape. Etapa 1/2023 are ca obiective:- Estimarea și identificarea efectivelor de taurine din rasele de carne din România, situatia la nivel național și perspectivele acestora în contextul pieței Europene; -Evaluarea caracterelor morfoproductive prin masuratori biometrice (metoda clasică) cu clasificarea animalelor vii după starea de îngrășare, precum și evoluția greutății corporale la vârsta de 6 și 12 luni la taurinele din rasele de carne din România.
Etapa 2/2024 are ca obiectiv: -Evaluarea non invazivă (ultrasunete) a producției de carne în carcasă prin analiza ecografică la nivelul mușchiului Longissimus Dorsi la tineretul taurin în vîrstă de 6 și 12 luni pentru a determina parametrii ecografici. Etapa 3/2025- Identificarea și determinarea de markeri moleculari specifici prin PCR și PCR RFLP a expresiei câtorva gene implicate în calitatea cărnii și reproducție la taurinele din România. Etapa 4/2026- Greutatea cărnii în carcasă va fi estimată prin ecuații de regresie multiplă a cantității de carne în carcasă la taurinele de carne din Romania. Astfel pentru a atinge obiectivele principale propuse în proiectul de față se vor efectua sutudii bibliografice ale raselor de taurine destinate cărnii luând în considerație cunoștințele, aplicațiile și reglementările noilor standarde UE și cerințele privind calitatea carcaselor la taurine. Se vor efectua măsurători corporale pentru determinarea greutății vii la vârsta de 6 și 12 luni și pentru a identifica tipul de conformație și dezvoltarea corporală la tineretul taurin din rasele destinate producției de carne din România. Se va face o descriere și o caracterizare a câtorva sisteme de evaluare a calității carnii în lume (sistemul Vest Europearn, sistemul American). Prin măsurători ecografice se vor determina parametrii ecografici: stratul de grăsime subcutanat, profunzimea mușchiului, suprafața ochiului de mușchi și perimetrul ariei musculare din zona mușchiului Longisimus dorsi. Estimarea cantității de carne în carcasă pornind de la măsurarea directă a greutații vii și a parametrilor ecografici, având ca punct de pornire: stratul de grăsime subcutanat, profunzimea mușchiului, suprafața ochiului de mușchi și perimetrul ariei musculare din zona mușchiului Longisimus Dorsi. Se va realiza optimizarea metodelor de determinare a markerilor moleculari specifici calitații cărnii și cei destinați reproducției la rasele de taurine studiate în România; compararea rezultatelor obținute prin metoda clasică și metodele moderne pentru a determina standarde noi de calitate destinate producției carne la rasele de taurine actuale din România, specializate pentru calitatea cărnii, în acord cu noile standarde și cerințe ale consumatorilor privind standardele de calitate ale cărnii la nivel European. Rezultatele vor fi diseminate prin comunicări la simpozioane, lucrări științifice în reviste de specialitate.
Obiective:
- Estimarea și identificarea efectivelor de taurine din rasele de carne din România, situatia la nivel național și perspectivele acestora în contextul pieței Europene;
-Evaluarea caracterelor morfoproductive prin masuratori biometrice (metoda clasică) cu clasificarea animalelor vii după starea de îngrășare, precum și evoluția greutății corporale la vârsta de 6 și 12 luni la taurinele din rasele de carne din România.
-Evaluarea non invazivă (ultrasunete) a producției de carne în carcasă prin analiza ecografică la nivelul mușchiului Longissimus Dorsi la tineretul taurin în vîrstă de 6 și 12 luni pentru a determina parametrii ecografici.
- Identificarea și determinarea de markeri moleculari specifici prin PCR și PCR RFLP a expresiei câtorva gene implicate în calitatea cărnii și reproducție la taurinele din România.
- Greutatea cărnii în carcasă va fi estimată prin ecuații de regresie multiplă a cantității de carne în carcasă la taurinele de carne din Romania.
Derularea activităților:
|
Etapa 1 – 2023 : Estimarea și identificarea efectivelor de taurine din rasele de carne din România, situatia la nivel național și perspectivele acestora în contextul pieței Europene. |
|
1.1. Studiu bibliografic privind rasele de taurine destinate cărnii vor fi caracterizate luând în considerație cunoștințele, aplicațiile și reglementările noilor standarde UE și cerințele privind calitatea carcaselor la taurine |
|
1.2 Evaluarea caracterelor morfoproductive prin masuratori biometrice (metoda clasică) cu clasificarea animalelor vii după starea de îngrășare, precum și evoluția greutății corporale la vârsta de 6 și 12 luni la taurinele din rasele de carne din România. |
|
1.3 Se vor efectua măsurători corporale pentru determinarea greutății vii la vârsta de 6 și 12 luni și pentru a identifica tipul de conformație și dezvoltarea corporală la tineretul taurin din rasele destinate producției de carne din România. |
|
1.4 Se va face o descriere și o caracaterizare a câtorva sisteme de evaluare a calității carnii în lume (sistemul Vest Europearn, sistemul American). |
|
Etapa 2 -2024: Evaluarea non invazivă (ultrasunete) a producției de carne în carcasă prin analiza ecografică la nivelul mușchiului Longissimus Dorsi la tineretul taurin în vîrstă de 6 și 12 luni pentru a determina parametrii ecografici |
|
2.1 Prin măsurători ecografice se vor colecta date despre parametrii ecografici: stratul de grăsime subcutanat, profunzimea mușchiului, suprafața ochiului de mușchi și perimetrul ariei musculare din zona mușchiului Longisimus dorsi. |
|
2.2 Analiza și evaluarea parametrilor ecografici obținuți stratul de grăsime subcutanat, profunzimea mușchiului, suprafața ochiului de mușchi și perimetrul ariei musculare de la nivelul mușchiului Longissimus Dorsi |
|
Etapa 3 - 2025: Identificarea și determinarea de markeri moleculari specifici prin PCR și PCR RFLP a expresiei câtorva gene implicate în calitatea cărnii și reproducție la taurinele din România |
|
3.1 Se va face o optimizare a metodei PCR RFLP pentru câteva gene implicate în calitatea cărnii și reproducției |
|
3.2 Determinarea prin PCR și PCR RFLP a expresiei câtorva gene implicate în calitatea și cantitatea cărnii și reproducției la taurine pentru a le identifica ca markeri moleculari specifici |
|
Etapa 4 - 2026: Greutatea cărnii în carcasă va fi estimată prin ecuații de regresie multiplă a cantității de carne în carcasă la taurinele de carne din Romania. |
|
4.1 Estimarea cantității de carne în carcasă pornind de la măsurarea directă a greutații vii și a parametrilor ecografici, având ca punct de pornire: stratul de grăsime subcutanat, profunzimea mușchiului, suprafața ochiului de mușchi și perimetrul ariei musculare din zona mușchiului Longisimus Dorsi. |
|
4.2 Compararea rezultatelor obținute prin metoda clasică și metoda ecografică pentru a determina standarde noi de calitate destinate producției carne la rasele de taurine actuale din România, specializate pentru calitatea cărnii, în acord cu noile standarde și cerințe ale consumatorilor privind standardele de calitate ale cărnii la nivel European |
Rezultate obținute:
|
- Studiu bibliografic privind rasele de taurine destinate cărnii vor fi caracterizate luând în considerație cunoștințele, aplicațiile și reglementările noilor standarde UE și cerințele privind calitatea carcaselor la taurine |
|
-Evaluarea caracterelor morfoproductive prin masuratori biometrice (metoda clasică) cu clasificarea animalelor vii după starea de îngrășare, precum și evoluția greutății corporale la vârsta de 6 și 12 luni la taurinele din rasele de carne din România. |
|
-Măsurători corporale pentru determinarea greutății vii la vârsta de 6 și 12 luni și pentru a identifica tipul de conformație și dezvoltarea corporală la tineretul taurin din rasele destinate producției de carne din România. |
|
-Descrierea și caracaterizarea câtorva sisteme de evaluare a calității carnii în lume (sistemul Vest Europearn, sistemul American). |
Rezultate obtinute:
Faza 1/2023 : Estimarea și identificarea efectivelor de taurine din rasele de carne din România, situația la nivel național și perspectivele acestora în contextul pieței Europene
Rezultate obținute:
Activitatea 1.1: Studiu bibliografic privind rasele de taurine destinate cărnii vor fi caracterizate luând în considerație cunoștiințele, aplicațiile și reglementările noilor standarde UE și cerințele privind calitatea carcaselor de taurine
Aberdeen Angus este o rasă de carne foarte cunoscută în țara noastră în rândul crescătorilor de taurine care au început să se alinieze la noile cerințe ale consumatorilor europeni privind calitatea și cantitatea cărnii. Charolaise își are originea în Franța, este foarte apreciată pentru calitatea cărnii sale, pentru randamentul de creștere al vacilor și pentru capacitatea sa de a se adapta în climatul tării noastre. Rasa Limousin iși are originea în Franța, este o rasa de carne cu calități excepționale, caracterizată de rusticitate, are fătări ușoare.
Activitatea 1.2: Evaluarea caracterelor morfoproductive prin masuratori biometrice (metoda clasică) cu clasificarea animalelor vii după starea de îngrășare, precum și evoluția greutății corporale la vârsta de 6 și 12 luni la taurinele din rasele de carne din România
Datele legate de productia de carne, disponibile pana la ora actuala, pentru caracterizarea morfo-productiva a raselor de taurine din Romania, sunt cantaririle succesive efectuate la momentul lotizarii efectivelor. Asadar, aceste masuratori au fost utilizate pentru caracterizarea statistica a performantelor productive ale raselor. Greutatea corporală la 6 luni a fost de 222.78±1.06 kg la rasa Limousine, 221.38±1.66 la rasa Aberdeen Angus și 220.29±1.30 la rasa Charolaise. La 12 luni greutatea corporala a taurinelor din rasa Limousine a fost de 352.21±1.75, la 330.28±2.10 la rasa Charolaise. Sporul mediu zilnic de la naștere la 6 luni a fost de 1060.15±9.41 g la rasa Aberdeen Angus, 1025.97±5.85 la rasa Limousine, 999.75±7.30 g la rasa Charolaise, sporul mediu zilnic de la nastere la 12 luni a fost 860.54±4.75 la rasa Limousine și 794.46±5.65 la Charolaise.
Activitatea 1.3: Se vor efectua măsurători corporale pentru determinarea greutății vii la vârsta de 6 și 12 luni și pentru a identifica tipul de conformație și dezvoltarea corporală la tineretul taurin din rasele destinate producției de carne din România
S-au efectuat măsurători corporale la trei rase de carne de taurine Charolaise, Limusine și Angus pentru determinarea greutății corporale la vârsta de 6 și 12 luni. Datele efectivelor de animale provenite din cele trei rase de carne Charolaise, Limusine și Aberdeen-Angus au fost obținute prin intermediul Asociației de creștere a bovinelor pentru carne din România și Asociației Aberdeen Angus. Pentru evoluția greutății corporale la tineretul din rasa Angus la animalele măsurate s-a înregistrat greutatea vie de la naștere, greutatea la 6 luni și la 10 luni la un efectiv de 1121 taurine din care 410 masculi și 711 femele în 2021, iar în 2022 la un efectiv de 775 de capete dn care 315 masculi și 460 femele. La rasele Charolaise și Limousine au fost înregistrate greutățile corporale la naștere, 6 și 12 luni. În cazul rasei Charolaise efectivul total de animale tinere măsurate a fost de 1029 de capete, 321 masculi și 708 femele. În cazul rasei Limusine efectivul de animale măsurate total a fost de 1209 de capete 303 masculi și 906 femele. La toate cele trei rase Aberdeen Angus, Charolaise și Limousine, greutățile corporale și sporurile medii zilnice au fost mai mari la masculi decât la femele.
Activitatea 1.4: Se va face o descriere și o caracterizare a câtorva sisteme de evaluare a calității cărnii în lume (sistemul Vest Europearn, sistemul American)
Standardele europene pentru calitatea produselor alimentare se bazează pe trei piloni: siguranța alimentară, calitatea alimentelor și trasabilitatea acestora. Utilizare sistemului de evaluare EUROP în clasificarea carcaselor la rasele de taurine destinate producției de carne. Sistemul de clasificare EUROP este utilizat pentru evaluarea carcaselor după tipul de conformației și nivelul de grăsime cu ajutorul unei scale alfa numerice. Carcasele clasificate prin tehnologia Video Image Analysis (VIA) vor fi evaluate în sistemul englez prin intermediul grilei de 15 puncte. VIA este o metodă automată de evaluare și clasificare a carcaselor de animale în urma abatorizării.
Sisteme de evaluare a carcaselor la taurinele destinate producției de carne în America
Gradele de calitate indică factorii legați de caracteristicile senzoriale de frăgezime, aromă, culoare, textură și suculență. Clasele de calitate USDA pentru carcasele de vită și junincă sunt determinate și de echilibrul dintre starea de maturitate și gradul de marmorare al cărnii. Maturitatea carcasei este strâns legată de frăgezimea cărnii de vită. Gradele de maturitate: A- 9-30 luni, B-30-42 luni, C-42-72 luni, D-72-96 luni, E- mai mult de 96. Clasele finale de calitate sunt obținute printr-o evaluare combinată între maturitatea cărnii și marmorarea acesteia. Există cinci clase ale randamentului cărnii în carcasă la taurine : carcasele cu gradul de randament 1-peste 52,3% carne în carcasa, gr.2- 50,1-52,3%, gr.3-47.8-50%, gr.4-45,5-47,7%, și gradul de randament 5- mai puțin de 45.5% carne în carcasă. Scopul evaluării carcasei de vită este de-a ajuta producătorii de carne de vită să producă carcase de vită de înaltă calitate cu randament ridicat, să identifice rasele superioare pentru reproducție, să promoveze un produs cerut de consumatori, comercial.
Faza 2/2024 Evaluarea non-invazivă (ultrasunete) a producției de carne în carcasă prin analiza ecografică la nivelul mușchiului Longissimus Dorsi la tineretul taurin in varsta de 6 si 12 luni pentru a determina parametrii ecografici.
Rezultate :
Activitatea 2.1. Prin măsurători ecografice se vor colecta date despre parametrii ecografici : stratul de grăsime subcutanat, profunzimea mușchiului, suprafața ochiului de mușchi și perimetrul ariei musculare din zona mușchiului Longissimus dorsi.
Cerintele consumatorilor pentru carnea de vită s-au schimbat de-a lungul timpului, calitatea cărnii este considerată o prioritate. Metoda cu ultrasunete este utila în evaluarea producției de carne deoarece este o tehnică non- invazivă. Măsurătorile colectate utilizând metoda ecografică pot fi utilizate pentru a estima randamentul carcasei și calitatea cărnii. Măsurătorile au fost efectuate prin metoda cu ultrasunete pe tineret taurin din rasa Aberdeen Angus cu varsta de 6 luni și 12 luni din ferma experimentală a institutului. Grosimea stratului de grăsime subcutanat de la nivelul mușchiului Longissimus dorsi a înregistrat o medie de 2.3±0.18 mm la tineretul taurin de 6 luni și 4.16±0.30 mm la tăurașii de 12 luni. Media pentru profunzimea mușchiului Longissimus dorsi a fost de 4.1±0.30 cm la tăurașii în vârstă de 6 luni și 5.13±0.03 cm la tăurașii în vârstă de 12 luni. Media pentru suprafața ochiului de mușchi Longissimus dorsi a avut valoarea de 31.21 cm2±1.32 la tăurașii în vârstă de 6 luni și 56.44 cm2±0.89 la tăurașii în vârstă de 12 luni. Media pentru perimetrul mușchiului Longissimus dorsi a fost de 22.79±0.18 cm la tăurașii de 6 luni și 31.69±0.036 cm la tăurașii de 12 luni.
Activitatea 2.2. Analiza și evalurea parametrilor ecografici obținuți, stratul de grăsime subcutanat, profunzimea mușchiului, suprafața ochiului de mușchi și perimetrul ariei musculare de la nivelul mușchiului Longissimus Dorsi.
S-a realizat prelucrarea imaginilor ecografice înregistrate în ecograf pentru determinarea dimensiunilor caracterelor studiate la tineretul taurin în vârstă de 6, 10 și 12 luni. Prelucrarea datelor primare s-a realizat cu ajutorul statisticilor. Greutatea corporală a tineretului taurin în vârstă de 6 luni a fost de 252.66±7.08 kg , la vârsta de 10 luni a fost de 352.2±15.42 kg iar la 12 luni 458.66±10.97. Grosimea stratului de grăsime subcutanat de la nivelul mușchiului Longissimus dorsi a înregistrat o medie de 2.3±0.18 mm la tineretul taurin de 6 luni, 4 ±0.28 la tineretul taurin de 10 luni și 4.16±0.30 mm la tăurașii de 12 luni. Media pentru profunzimea mușchiului Longissimus dorsi a fost de 4.1±0.30 cm la tineretul taurin în vârstă de 6 luni, 4.62±0.21 la 10 luni și 5.13±0.03 cm la tineretul taurin în vârstă de 12 luni. Media pentru suprafața ochiului de mușchi Longissimus dorsi a avut valoarea de 31.21 cm2±1.32 la tăurașii în vârstă de 6 luni , 45.18±2.31 la tineretul taurin de 10 luni și 56.44 cm2±0.89 la tăurașii în vârstă de 12 luni. Media pentru perimetrul mușchiului Longissimus dorsi a fost de 22.79±0.18 cm la tăurașii de 6 luni, 28.23±0.34 la tineretul taurin de 10 luni și 31.69±0.036 cm la tăurașii de 12 luni.
Metoda ecografică este o metodă valoroasă pentru ameliorarea calitativă a caracterelor privind carcasele de bovine. Datele fenotipice obținute prin măsurătorile ecografice sunt folosite pentru a selecta cele mai bune taurine pentru producția de carne. Această metodă permite identificarea și selectarea animalelor care au caracteristicile dorite pentru fiecare tip de piață. Permite adaptarea dietei și programarea sacrificării animalelor în funcție de cerințele piețeiSuprafața ochiului de mușchi este corelată cu dimensiunea animalului, pe măsură ce un animal devine mai mare, suprafața mușchilor crește. Suprafața ochiului de mușchi este un estimator al conținutului de carne. Rezultatele obținute prin tehnica cu ultrasunete au un rol major în industria cărnii furnizând informații despre carcase și caracterele producției de carne la vacile de carne. Rentabilitatea industriei cărnii de vită depinde de performanțele animalelor îngrășate dar și de efectivul de reproducție. Programele de ameliorare trebuie concepute astfel încât să fie selecționate animalele cu genotipuri favorabile pentru performanța maternă cât și cea de finisare.
Diseminarea rezultatelor:
Lucrari ISI:
Rotar M.C, Pelmuș R.S., Gras M.A, Van C. Estimation the genetic parameters for growth traits in Aberdeen Angus breed. Scientific Papers Series D., Animal Science, 2024, Vol. LXVII, No. 2, 60-64.
Lucrări BDI:
Pelmuș R.S., Grosu H., Gras M.A., Van C., Rotar M.C. Estimation the genetic parameters for age at first calving in Charolais and Limousine breeds. Archiva Zootehnica, 2024, 27, 1, 48-60.
Pelmuș R.S., Grosu H., Rotar M.C., Gras M.A., Van C. Estimation the genetic parameters for calving score using an animal model, in Aberdeen Angus breed. Animal Science and Biotechnologies 2024, 57,1, 242-246.
Rotar M.C, Pelmuș R.S., Gras M.A, Van C. Estimation the genetic parameters for age at the first calving and calving interval in Romanian Spotted, Simmental. Animal Science and Biotechnologies 2024, 57, 1, 256-259.
Pelmuș R.S.,Grosu H.,Rotar M.C, Gras M.A, Van C. Estimation the breeding value for calving score using a threshold model, in Limousine breed. Acta fytotechnica et Zootehnica 27, 2024(3): 193–197.
Rotar M.C., Pelmuș R.S, Gras M.A., Van C. Study of the age at first calving in Aberdeen Angus breed. Animal & Food Sciences Journal, 2024, 132-136.
Pelmuș R.S., Rotar M.C., Gras M.A., Van C. Comparative Research on Breeding Value Prediction for Calving Score in Beef Breed Cattle. Bulletin of University of Agricultural Sciences and Veterinary Medicine Cluj-Napoca. Animal Sciences and Biotechnologies, 2025, 82, 2, 56-62.
Faza 3/2025 Identificarea și determinarea de markeri moleculari specifici prin PCR și PCR RFLP a expresiei câtorva gene implicate în calitatea cărnii și reproducție la taurinele din România
Activitatea 3.1: - Se va face o optimizare a metodei PCR RFLP pentru câteva gene implicate în calitatea cărnii și reproducției
Calpastatina este o genă asociată cu calitatea cărnii, frăgezimea cărnii, conținutul în grăsime, sporul în greutate și randamentul carcasei. Primerii pentru Calpastatina bovină cu secvențele Bovine CAST1 Fw au fost: TGG GGG CCC AAT GAC GCC ATC GAT G, Bovine CAST1 Rw GGG TGG AGC AGC AGC ACT TCT GAT CAC C, Bovine CAST2 Fw: CCC CGA CTG CGT ACC AAT TCC GAA GTA AAG CCA AAG CCA AAG GAA CA, Bovine CAST 2 Rw: ATT TCT CTG ATG GTC GCT GCT CAC T. Miostatina (MSTN) este o genă asociată cu hipertrofia musculară (creșterea masei musculare) la rasele de vaci de carne.Primerii pentru gena miostatinei au fost: Bovine MST Fw CAA GTT GTC TCT CAG ACT GG, Bovine MSTN Rw: CTC CTC CTT ACA TAC AAG CC. HSP ( proteinele de șoc termic) este o gena care este asociată cu calitatea spermei și procentul de fertilitate. Congelabilitatea este este capacitatea spermatozoizilor de a-si menține vitalitatea și calitatea în condițiile diverselor stresuri în timpul procesului de crioconservare, ceea ce este foarte important pentru succesul fertilizării în programele de insămânțări artificiale. HSP din sperma bovină poate fi marker al criotoleranței și congelabilității. Primerii pentru gena HSP au fost: Bovine HSP 70 Fw: GCCAGGAAACCAGAGACAGA și Bovine HSP 70 Rw: CCTACGCAGGAGTAGGTGGT.
Reacţia PCR (Polymerase Chain Reaction) este o tehnică larg folosită în scopul amplificării în vitro a unui fragment specific de ADN cu primeri desemnaţi. Tehnica PCR reprezintă o metodă de amplificare rapidă a unei secvenţe de nucleotide de interes. În reacţia PCR se folosesc două secvenţe de primeri oligonucleotidici desemnaţi: un primer este utilizat pentru a determina sinteza catenei directe (primer sens sau forward) iar celălalt pentru a determina sinteza catenei complementare a ADN (primer antisens sau reverse). În timpul reacţiei, ADN polimeraza catalizează sinteza unei noi catene de ADN complementare cu matriţa în direcţia 5’-3’. Cei doi primeri flanchează terminal regiunea ADN de interes. După o rundă de amplificare se constată prezenţa a două copii ale secvenţei ţintă, după două runde a patru astfel de copii, amplificarea având un caracter exponenţial şi ducând teoretic la 2n copii ale secvenţei ţintă, după n cicluri de amplificare ale reacţiei PCR. Astfel produşii rezultaţi în urma unui ciclu al reacţiei PCR vor fi baza sintezei de noi molecule ADN în viitorul ciclu. Reacţia PCR prezintă trei etape: denaturarea, hibridizarea şi extensia. Etapa de denaturare constă în încălzirea amestecului de reacţie (95°C) în scopul desfacerii structurii ADN dublu catenar. Hibridizarea sau alinierea primerilor constă în asigurarea temperaturii necesare procesului de ataşare a primerilor oligonucleotidici la zonele complementare de pe catena ADN. Aceasta este faza critică a reacţiei de amplificare, deoarece legarea corectă a primerilor trebuie să se realizeze numai în zona ţintă. Faza de extensie sau elongare presupune sinteza segmentului de ADN şi este realizată, de obicei la 72°C.
Optimizarea tehnicii de amplificare prin PCR
Reactia PCR pentru CAST1, CAST2: etapa initiala 10 minute la 95oC, denaturare 30 sec la 95oC, anelare 30 sec la 60oC, extindere 30 sec la 72°C, extensie finală 10 minute la 72°C. Reactia PCR pentru miostatina, HSP 70: etapa initiala 10 minute la 95oC, denaturare 30 sec la 95oC, anelare 30 sec la 59oC, extindere 30 sec la 72°C, extensie finală 10 minute la 72°C.
Se adauga 10 ul de proba la 21 ul de Mix.
Programul PCR-RFLP pentru identificarea miostatinei MSTN, CAST1, CAST2, HSP 70 a fost:
180 minute la 37 oC folosind un amestec cu un volum total de 31 μl
Produșii RFLP după digestie au fost vizualizați pe gel de agaroză 4 %.
Activitatea 3.2. - Determinarea prin PCR și PCR RFLP a expresiei câtorva gene implicate în calitatea și cantitatea cărnii și reproducției la taurine pentru a le identifica ca markeri moleculari specifici
Tehnica RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism) presupune amplificarea unui fragment din ADN urmată de digestia acestui fragment cu o enzimă de restricţie şi separarea produşilor obţinuţi prin electroforeză.
Analiza locilor CAST/MspI a demonstrat prezența alelelor M și N, precum și genotipurile MM, MN și NN. În populatia examinata cea mai frecventa a fost alela M (83,5%), în timp ce frecvența alelei N a fost de 16,5%.
Analiza locilor MSTN/ HaeIII a demonstrat prezența alelelor C și G, precum și genotipurile CC, CG și GG. În populatia examinata cea mai frecventa a fost alela G (53%), în timp ce frecvența alelei C a fost de 47%.
Analiza locilor HSP70/ HindIII a demonstrat prezența alelelor A și B, precum și genotipurile AA, AB și BB. În populatia examinata cea mai frecventa a fost alela B (64%), în timp ce frecvența alelei A a fost de 36%.
Diseminarea rezultatelor:
Lucrări științifice ISI:
Pelmuș R.S., Rotar M.C., Gras M.A., Van C. Estimation the genetic parameters for birth weight and weaning weight in Limousine breed. Scientific Papers. Series D. Animal Science, 2025, vol. LXVIII, no 1, 26-30.
Rotar M.C., Pelmuș R.S., Gras M.A., Van C. Estimation the genetic parameters for milk yield and wool in Țurcana breed. Scientific Papers. Series D. Animal Science, vol. LXVIII, 1, 2025, 63-68.
Rotar M.C., Pelmuș R.S., Gras M.A., Van C. Pre-weaning performance and genetic efficiency indices in Charolais and Limousine calves raised in Romania. Applied Sciences, 2025, 15.16, 9141.
Lucrări BDI:
Pelmuș R.S., Rotar M.C., Gras M.A., Van C. The genetic parameters for average daily gain and Kleiber Ratio in Charolais breed. Scientific Papers: Animal Science and Biotechnology, 2025, 58(1), 50-53.
Rotar M.C., Pelmuș R.S., Gras M.A., Van C. The genetic parameters for average daily gain and Kleiber ratio in Aberdeen Angus Breed, Scientific Papers: Animal Science and Biotechnology, 2025, 58(1), 54-58.
Pelmuș R.S.,Rotar M.C., Gras M.A., Van C. Genetic parameters for average daily gain and Kleiber ratio in Limousine breed. Archiva Zootechnica, 2025, 28(2), 5-14. Doi: 10.2478/azibna-2025-0011.
Rotar M.C., Pelmuș R.C., Gras M.A., Van C. Estimation the genetic parameters for calving interval in Charolaise and Limousine breeds. Archiva Zootechnica, 2025, 28(2), 15-23.Doi:10.2478/azibna/2025-0012.
Pelmuș R.S.,Rotar M.C., Gras M.A., Van C. Genetic Parameters for Productive Longevity in Limousine Breed. Bulletin of University of Agricultural Sciences and Veterinary Medicine Cluj-Napoca. Animal Science and Biotechnologies, 82, 2, 63-70.
Rotar M.C., Pelmuș R.S., Gras M.A., Van C. Estimation the genetic parameters for milk production and reproduction traits in Carpatina goat breed.Bulletin of University of Agricultural Sciences and Veterinary Medicine Cluj-Napoca. Animal Science and Biotechnologies. (articol în recenzie).
